Colorants et Réactifs

Le nombre de tissus de Vertébrés qui se prête à l'examen vital est assez réduit. Le matériel idéal pour ce type d'étude:

- cellules habituellement isolées dans un milieu liquide. Ex: cellules sanguines et protistes
- des petits métazoaires transparents. Ex: Rotifères, petits Vers, larves d'Arthropodes, de Mollusques ou d'Echinodermes.
- des fragments de métazoaires facilement isolables. Ex: gonades d'Invertébrés, fragments d'épithélium
- des organes entiers. Ex: branchies de Moule, aile d'Insecte, poumon de Grenouille, pancréas de Rongeur

L'identification certaine d'une structure dans des cellules vivantes ne peut découler que de colorations et réactions histochimiques

Il s'agit de coloration sur des tissus qui resteront vivants durant l'étude. Cette méthode représente souvent une meilleure mise en évidence des structures puisqu'elle ne comporte que peu de traitements sur les tissus.

note: Cela implique de prendre en compte la compléxité de la matière vivante et chaque coloration vitale devient, en fait, une expérience de physiologie cellulaire, impliquant une critique du résultat brut. En effet, les colorations vitales mettent en jeu des composés chimiques dont l'innocuité, loin d'être évidente, doit être démontrée dans chaque cas

L'administration du colorant peut se faire à un animal vivant de manière sous-cutanée, intra-veineuse ou (moins souvent) administrés par voie buccale. La vitesse d'apparition dans un organe donné dépend évidemment de la voie choisie. L'injection intra-veineuse aboutit à la répartition la plus homogène mais c'est aussi la plus toxique (toxicité d'origine inconnue d'après la littérature utlisée)…

Les colorants non toxiques, susceptibles d'être des colorants vitaux sont tous des colorants basiques. Les colorants acides sont tous toxiques et pénètrent très mal

Les colorations vitales de tissus végétraux sont les mêmes que pour les tissus animaux.

Quelques liquides physiologiques pour l'étude de matériaux vivants:

Colorants et Réactifs

Colorant / Réactifs	valeurs	Utilisation / mise en évidence
Acétate de sodium		extraction d’ADN
Acide picrique	cristaux en aiguille	m.e.e. du potassium
APS = acide périodique Schiff (= fuschine) H ₅ IO ₆	coloration rouge des polysaccharides	colore les parois cellulaires cellulosiques ou pectiques; également les grains d'amidon
Alizarine (V)		coloration d'os
Alkanine		coloration liège, matières grasses, résines
Azan	collagène, mb basales, mucus colorés en bleu noyau coloré en rouge vif	méthode de coloration du tissu conjonctif (mais peut servir à d'autres types cellulaires)
Bichromate de potassium	coloration brune	m.e.e. des tanins.
Bleu Alcian	coloration bleue (coloration verte si Van Gieson)	coloration de certains type de mucus et du cartilage méthode utilisée avec le Van Gieson
Bleu de bromothymol	jaune (pH < 6) à bleu (pH > 7,6)	indicateur de pH
Bleu de méthylène (V)	colorant bleu	simple colorant, soluble dans l'eau et dans l'éthanol peut être utilisé comme indicateur de pH (id. DCPIP)
Bleu de molybdène	coloration bleue des noyaux et composés pectiques	m.e.e. des composés pectiques
Bleu de toluidine (V)	colore les constituants acides en divers teintes de bleu	m.e.e. des chromosomes (ex: chromos. géants de chironome)
Bleu pyrrol (V)		étude des histiocytes (tissu conjonctif), excrétion et examen des vaisseaux lymphatiques
Bleu trypan (V)		étude des histiocytes (tissu conjonctif), excrétion et examen des vaisseaux lymphatiques
Carbonate de sodium	(Na₂CO₃)	utilisé pour neutraliser les acides organiques
Carmin	coloration rouge	parois cellulosiques
Carmin acétique	coloration rouge	colorant des noyaux (+HCl + rinçage + chauffer)
Chlorure de baryum	précipité blanc	m.e.e. des sulfates
Chlorure de cobalt	sec: bleu vif humide: rose	variations hygrométriques, papier indicateur d'humidité
Cobaltinitrite de sodium	précipité jaune	m.e.e. du potassium
Colorant de Mirand = double colorant de Mirand	addition du vert d'iode et du carmin.
Coloration de la réticuline	coloration bleue-noir	m.e.e. de la réticuline (tissu conjonctif)
DCPIP Dichlorophénol-indophénol	incolore: réduit bleu: oxydé	m.e.e. production de O2 des plantes (photoS)
Dinitro 2,4 phénol	incolore (pH < 2,8) à jaune (pH > 4,7)	indicateur de pH
Dinitro 2,5 phénol	incolore (pH < 4) à jaune (pH > 5,8)	indicateur de pH
Diphénylamine sulfurique	coloration bleue violacé	dosages de nitrites ou de nitrates
Eau iodée	voir Lugol
Eau de chaux	précipité de carbonate de calcium en présence de CO₂	m.e.e. de CO₂
Empois d’amidon		activité amylasique
Eosine	coloration en rouge et rose	colorant acide qui colore les structures histologiques basiques (ex: protéines du cytoplasme) technique courante en histologie (hématoxyline et éosine)
Feulgen	voir Réactif de Schiff	Méthode d’étude des chromosomes
Fuschine	voir APS
Giemsa	bandes noires	marquage des bande G chromosomiques et marquage des bandes C (centromères) + constrictions secondaires des chromosomes dans des conditions particuliaires
Giemsa	noyau coloré en noir cytoplasme coloré en bleu pâle érythrocyte coloré en rose pâle	méthode classique de coloration des cellules sanguines et des frottis (moelle osseuse)
Glycérine	observation cristaux microscope	m.e.e. inuline (Composées: tubercule de Dahlia)
Hématoxyline	coloration en bleu violacé	colorant basique qui colore les structures histologiques acides: ADN et ARN (noyau et REG) technique courante en histologie (hématoxyline et éosine)
Liqueur de Fehling	solution bleue > précipité rouge brique	m.e.e. des oses réducteurs (fonctions cétone ou aldéhyde)
Lugol =Eau iodée = réactif iodo-ioduré (I ₂ +IK)	coloration bleu-violet de l'amidon et brun-acajou du glycogène.	m.e.e des polymères de glucose a : amidon (glycogène et cellulose dans certains cas) (+ chauffer)
May-Grünwald
Méthode de Nissl (et bleu de méthylène)	le REG forme un amas (corps de Nissl)	colore le REG des neurones
Moutarde de Quinacrine	fluorescence sous lumière ultraviolette	marquage des bandes Q chromosomiques
Nitrate d’argent	précipité de chlorure d’argent en présence de chlorures	m.e.e des chlorures
Nitrate d’argent	précipité d'argent métallique sur les bords du tube à essai	m.e.e. des oses réducteurs (id. Liqueur de Fehling)
Ninhydrine
Noir Soudan (+acide osmique)	coloration brun-noir	m.e.e. des graisses
Orcéine acétique		m.e.e. des chromosomes (ex: chromosomes géants de chironome)
Oxalate d'ammonium	précipité blanc	m.e.e. du calcium
Perchlorure de fer	coloration noire	m.e.e. des tanins
Phénolphtaléine	incolore (pH < 8,2) à rouge violet (pH > 9,8)	indicateur de pH
Phénylhydrazine
Phloroglucine	coloration en rouge	spécifiquement de la lignine en milieu acide (+HCl)
Quinacrine	voir Moutarde de Quinacrine
Réactif ammoniaco-magnésien	précipité blanc en présence de phosphate	m.e.e de phosphates
Réactif du biuret	violet si liaisons peptidiques	m.e.e. de liaisons peptidiques (polypeptides et protéines. pas oligopeptides)
Réactif iodo-ioduré	voir Lugol
Réactif de Kastle-Mayer	teinte rose en présence de cuivre	m.e.e. de cuivre
Réactif de Millon	coloration rouge orangé	m.e.e. des protéines (les acides aminés phénoliques)
Réactif de Molish = Naphtol	coloration violette	m.e.e. de tous les oses et osides
Réactif de Nessler	coloration jaune à brun	m.e.e. de l’ammonium
Réactif nitromolybdique	précipité jaune de phosphomolybdate d’ammonium	m.e.e. des phosphates
Réactif des phosphates	bleue en présence de phosphates.	m.e.e. et dosage des phosphates
Réactif de Schiff (APS et Feulgen)	coloration en rouge en présence d'un réducteur	m.e.e. des aldéhydes (ribose de l’ADN dans la méthode de Feulgen)
Réactif au sulfate ferreux	coloration rose violacée	m.e.e. des nitrates
Rouge Congo	se fixe sur les glucanes (cellulose = polymère de glucane)	m.e.e. Cellulose colorant: Filtre rouge pour l’étude de la photosynthèse
Rouge de Crésol	jaune (pH < 7) à rouge (pH > 8,8)	indicateur de pH ( et [CO₂] ).
Rouge de méthyl	rouge (pH < 4,4) à jaune orangé (pH > 6,2)	indicateur de pH
Rouge de phénol	jaune (pH < 6,6) à rouge (pH > 8,2)	indicateur de pH
Rouge neutre (V)	rouge (pH < 6,8) à jaune (pH > 8) à pH<5 le rouge neutre se fixe sur la membrane des vacuoles à pH 7,5 le rouge neutre entre dans les vacuoles	indicateur de pH Utilise également la propriété des vacuoles de retenir les colorants à faible concentration jusqu'à la mort cellulaire (à pH 7)
Rouge de ruthénium	colore en rouge la pectine	m.e.e. pectines acides
Rouge Soudan = Soudan III	coloration rouge	m.e.e. des lipides (+ cires, résines, cutine, subérine, latex). solvant organique
Safranine	coloration rouge	coloration bois et liège
Soudan III	voir Rouge Soudan
Sulfate ferreux	voir réactif au sulfate ferreux
Test de la flamme	coloration jaune de la flamme	m.e.e. du sodium (dans une solution)
Thiocyanate de potassium	coloration rouge	m.e.e. du fer (Fe⁺⁺⁺)
Thymolphtaléine	incolore (pH < 9,3) à bleu (pH > 10,5)	indicateur de pH
Trichrome de Masson	collagène en vert ou bleu noyau (basophile) en bleu cytoplasme, kératine en rouge vif	m.e.e. les colorants du tissu conjonctif en particulier le collagène
Van Gieson	collagène coloré en rouge noyau coloré en bleu cytoplasme coloré en jaune	méthode utilisée pour le tissu conjonctif voir aussi Bleu Alcian
Vert d’iode	coloration verte	tissus lignifiés ou subérifiés colore également le chondriome
Vert de méthyle
Vert de méthyle acétique	coloration verte	m.e.e. des chromosomes (ex: chromos. géants de chironome) (+ acide acétique)
Vert diazine (V) = Vert Janus		coloration du chondriome.
Vert Janus (V)	Voir Vert Diazine
Violet gentiane		coloration du chondriome
Violet dahlia		coloration du chondriome
Violet neutre de Godfrin	coloration rouges des composés pectiques, violet foncé du bois et du liège	coupe dans un végétal

Note: l'indication (V) après le nom du colorant indique qu'il s'agit d'un colorant vital.

Tissus de Vertévrés poikilothermes et Invertébrés terrestres ou d'eau douce	Solution de Ringer: Eau dististillée, NaCl, KCl, NaCO₃, CaCl₂
Tissus de Vertébrés homéothermes	Liquide de Locke: Eau dististillée, NaCl, KCl, NaCO₃, CaCl₂, glucose Liquide de Tyrode: Eau distillée, NaCl, KCl, NaCO₃,CaCl₂, MgCl₂, phospahte mono-Na
Autre liquide physiologique:	Solution de Knop: Eau distillée, KCl, CaNO3, MgSO4, phosphate mono-K, FeCl2, glucose

Bleu de méthylène	Dissoudre 1 g de bleu de méthylène dans 1 litre d'eau distillée
Bleu de méthylène phéniqué	Dissoudre 2 g de bleu de méthylène et 20 g de phénol dans 100 ml d'alcool à 95 %
Liquide de lugol	Broyer dans un mortier, 1 g d'iode bisublimé et 2 g d'iodure de potassium. Dissoudre dans 100 ml d'eau distillée. Pour permettre la dissolution totale de l'iode, ajouter un peu d'iodure. Conserver la solution dans un flacon en verre brun. Pour l'utiliser, il faut le diluer. Le produit se décolore avec le temps.
Carmin acétique	Dissoudre 0,5 g de carmin 40 dans un mélange de 55 ml d'eau distillée et 45 ml d'acide acétique. Porter le mélange à ébullition, et laisser ensuite bouillir 1 à 2 minutes. Laisser refroidir puis filtrer.

Les colorants. Méthodologie.

Quelques liquides physiologiques pour l'étude de matériaux vivants:

Colorants et Réactifs

Préparation des colorants et réactifs